非酒精性脂肪肝（NAFLD）是最常见的肝脏代谢性功能障碍疾病，它包括广泛的病理过程，从脂肪变性到非酒精脂肪性肝炎，以及随后的肝纤维化，肝硬化，甚至肝细胞癌。它影响着世界上25%以上的人口，是一个全球卫生挑战。NAFLD发病机制被认为是脂质和糖代谢的破坏。越来越多的证据表明，胰岛素抵抗（特别是肝脏胰岛素抵抗）通常会明显影响脂质和葡萄糖稳态。

胰岛素增敏剂，如格列酮和二甲双胍，已被证明能够有效减弱NAFLD的生化和组织学变化。然而，长期使用可导致骨丢失和体重增加，并增加患膀胱癌、充血性心力衰竭和乳酸性酸中毒的风险。因此，迫切需要探索无毒、安全、有效的治疗NAFLD的药物。

五味子是亚洲著名的传统草药，长期以来被广泛用于治疗病毒性和化学性肝损伤。药理研究表明，五味子及其木脂素类物质具有抗胰岛素抵抗、抗肥胖和降脂作用。

2023年1月，一篇题为Exploring the active compounds and potential mechanism of the anti-nonalcoholic fatty liver disease activity of the fraction from Schisandra chinensis fruit extract fraction based on multi-technology integrated network pharmacology发表于Journal of Ethnopharmacology杂志（影响因子5.195，Q1），报道了五味子提取物抗非酒精性脂肪肝（NAFLD）的活性成分及其潜在机制。

首先，作者为测定五味子提取物的主要抗NAFLD活性组分，从五味子中分离出HOF、ETA和PET 3个组分。然后使用游离脂肪酸（FFA）诱导的HepG2细胞模型，评价HOF、ETA和PET组分的抗NAFLD作用。油红O染色显示PET显著降低了细胞内脂质积累（图1A）。与油红O染色结果一致，PET处理显著降低了FFA诱导的HepG2细胞中的TG和TC水平，而HOF、ETA处理并没有显著降低TG和TC水平（图1B）。

以上结果表明，五味子提取物的活性部分以PET为主。

图1：五味子中的HOF、ETA和PET 组分对FFA诱导的HepG2细胞脂质积累的影响。（A）油红O染色图。（B）细胞内TG和TC的水平。

接下来研究者对PET组分中的生物活性成分及其靶点进行分析，发现主要活性化合物是3、24和27号物质，核心靶点是GSK3β、PIK3CA、EGFR、TNF、mTOR和JNK1（图2）。

图2：PET治疗NAFLD的靶点和活性成分的筛选。

通过GO和KEGG途径富集分析，建立了由3个主要的活性化合物和5个关键靶点组成的可能作用机制（图3）。其中，化合物3（GJ）被认为是主要参与NAFLD治疗的核心成分，它与胰岛素抵抗信号通路中包含的大多数靶点重叠。

图3：PET治疗NAFLD的可能药理机制。（A）Top 20 KEGG通路；（B）PET治疗NAFLD的可能药理机制。

因此，作者将化合物3（GJ）与PET一起视为靶成分，在体内实验中通过调节胰岛素抵抗途径进一步验证其抗NAFLD的作用。为了验证PET和基于网络药理学分析预测的化合物3的抗NAFLD作用，作者使用HFD喂养9周，构建了NAFLD小鼠模型。HFD喂养9周后，分别为小鼠口服PET和化合物3，给药4周。以PGZ作为阳性对照。ALT和AST是NAFLD的诊断标志，如图4A-B所示，与对照组相比，HFD组血清ALT和AST水平明显升高。给予PET和化合物3以剂量依赖的方式逆转了血清ALT和AST水平的升高。图4C的结果显示，与对照组相比，HFD喂养的小鼠的肝脏出现了明显的脂滴积累、球囊状变性和坏死。PET和化合物3治疗显著改善了这些组织学病变。与组织病理学改善一致，PET和化合物3的肝脏TG和TC水平呈剂量依赖性降低（图4D-E）。同时，用PET和化合物3治疗显著降低了血清胰岛素和MDA水平。

上述结果表明，PET和化合物3在HFD诱导的小鼠模型中具有抗NAFLD的作用。

图4：PET和化合物3（GJ）可以改善HFD诱导的NAFLD。

为了进一步评价PET和化合物3对葡萄糖耐量和胰岛素抵抗的影响，作者在小鼠中进行了IPGTT和IPITT实验。如图5所示，与对照组相比，在IPGTT和IPITT试验中，HFD喂养的小鼠的葡萄糖水平显著升高。使用PET和化合物3处理，显著降低了HFD小鼠的葡萄糖水平。

这些结果表明，PET和化合物3可以改善HFD诱导的NAFLD小鼠的糖耐量和胰岛素抵抗。

图5：PET和化合物3（GJ）显著改善NAFLD小鼠葡萄糖耐量和胰岛素敏感性（n = 5）。

接下来，作者探索了PET和化合物3抗NAFLD作用的分子机制。网络药理学分析表明，胰岛素抵抗可能是活性组分PET抗NAFLD作用的重要信号通路。于是作者通过对胰岛素抵抗通路相关的关键靶点Pik3ca、Gsk3β，Jnk1和Tnf-α的检测，发现模型组肝脏中Pik3ca和Gsk3的转录水平显著降低，Jnk1和Tnf-α转录水平显著升高。PET和化合物3处理，增加了HFD喂养小鼠的Pik3ca和Gsk3β的转录水平，降低了Jnk1和Tnf-α的转录水平（图6）。

图6：PET和化合物3（GJ）显著增加NAFLD小鼠肝脏中Pik3ca和Gsk3的mRNA，降低Jnk1和Tnf-α的mRNA水平（n = 6）。

该研究结果表明，五味子提取物中PET的活性部分，在体内外均具有较强的抗NAFLD活性。通过网络药理学和在体实验，作者发现抗NAFLD作用可归因于PET中包含的化合物3。其潜在机制与胰岛素抵抗通路相关，该通路可调控Pik3ca、Gsk3、Jnk1和Tnf-α的表达。本研究为五味子组分PET作为一种新的天然抗NAFLD药物提供了科学证据，并为进一步的机理研究提供了重要提示。